Ce que nous faisons
La ressource partagée d'analyse de flux et d'immunité (FIASR) offre un éventail complet de technologies de pointe sur diverses plateformes, notamment la cytométrie de flux et d'image, la protéomique, la métabolomique et les techniques de profilage spatial, pour soutenir les chercheurs de Roswell. La FIASR est reconnue par l'International Society for the Advancement of Cytometry (ISAC) pour son excellence opérationnelle et son respect des meilleures pratiques. La ressource partagée s'engage à élargir l'accès à des technologies uniques et à l'utilisation d'instruments de pointe, tout en maintenant un programme actif de formation de la communauté scientifique aux applications innovantes.
Liens rapides
Instruments
Liens utiles
- Logiciel d'analyse
- Nouveaux comptes
- Cursus de formation
- Notre équipe
- Citation de la subvention principale
- Données sur les installations pour les subventions
- Logiciel DeNovo (FCS Express)
- Conception de panneaux et visualiseurs spectraux
- Sociétés de cytométrie
Analyseurs de cytométrie de flux
Les analyseurs de cytométrie en flux sont disponibles 24h/7 et XNUMXj/XNUMX pour les utilisateurs formés en réservant du temps sur le calendrier FOM.
- 3L, 16 paramètres fluorescents avec 2 paramètres de diffusion
- Option échantillonneur à haut débit (plaque à 96 puits)
Zone | Filtre passe-bande | Fluorures courantes (liste non exhaustive) |
---|---|---|
Laser violet 405 nm | V450 / 50 | BV421, BV480, DAPI, Bleu Pacifique, V450, EF450, SB436, AF405, Violet LD |
V525 / 50 | BV510, V500, AmCyan, Aqua LD | |
V560 / 20 | Qdot565, BV570 | |
V585 / 15 | BV570 | |
V610 / 20 | BV605 | |
V660 / 20 | BV650 | |
V710 / 50 | BV711 | |
V780 / 60 | BV750, BV786, BV785 | |
Laser bleu 488 nm | B530 / 30 | FITC, BB515, GFP, AF488, CFSE |
B575 / 26 | PE, mOrange, AF568 | |
B610 / 20 | PECF594, PEAF610, PEDazzle594, PEeFluor610, ECD, PI | |
B695 / 40 | PerCPCy5.5, BB700, PerCP, PECy5, PECy5.5 7AAD, PEeFluor710 | |
B780 / 60 | PECy5, PEAF750 | |
Laser rouge 640 nm | R670 / 14 | Véhicule blindé de transport de troupes, AF647 |
R730 / 45 | AF700, APC-R700, DRAQ5 | |
R780 / 60 | APC-Cy7, APC-AF750, APCH7 |
- 4L, 18 paramètres fluorescents avec 2 paramètres de diffusion
- Option d'échantillonneur à haut débit (plaque à 96 puits)
Zone | Filtre passe-bande | Fluorures courantes (liste non exhaustive) |
---|---|---|
Laser UV 355 nm | U379 / 28 | BUV395, Indo-1 |
U460 / 14 | DAPI, Hoechst 33342, bleu LD, UV zombie | |
U740 / 35 | BUV737 | |
Laser violet 405 nm | V450 / 50 | BV421, BV480, DAPI, Bleu Pacifique, V450, EF450, SB436, AF405, Violet LD |
V525 / 50 | BV510, V500, AmCyan, Aqua LD | |
V585 / 15 | BV570 | |
V610 / 20 | BV605 | |
V660 / 20 | BV650 | |
V710 / 50 | BV711 | |
V780 / 60 | BV750, BV786, BV785 | |
Laser bleu 488 nm | B530 / 30 | FITC, BB515, GFP, AF488, CFSE |
B575 / 26 | PE, mOrange, AF568 | |
B610 / 20 | PECF594, PEAF610, PEDazzle594, PEeFluor610, ECD, PI | |
B695 / 40 | PerCPCy5.5, BB700, PerCP, 7AAD | |
B780 / 60 | PECy7, PEAF750 | |
Laser rouge 640 nm | R670 / 14 | Véhicule blindé de transport de troupes, AF647 |
R730 / 45 | AF700, APC-R700, DRAQ5 | |
R780 / 60 | APC-Cy7, APC-AF750, APCH7 |
- 4L, 18 paramètres fluorescents avec 2 paramètres de diffusion
Zone | Filtre passe-bande | Fluorures courantes (liste non exhaustive) |
---|---|---|
Laser UV 355 nm | U379 / 28 | BUV395, Indo-1 |
U460 / 14 | DAPI, Hoechst 33342, bleu LD, UV zombie | |
U740 / 35 | BUV737 | |
Laser violet 405 nm | V450 / 50 | BV421, BV480, DAPI, Bleu Pacifique, V450, EF450, SB436, AF405, Violet LD |
V525 / 50 | BV510, V500, AmCyan, Aqua LD | |
V585 / 15 | BV570 | |
V610 / 20 | BV605 | |
V670 / 30 | BV650 | |
V710 / 50 | BV711 | |
V780 / 60 | BV750, BV786, BV785 | |
Laser bleu 488 nm | B530 / 30 | FITC, BB515, GFP, AF488, CFSE |
B575 / 26 | PE, mOrange, AF568 | |
B610 / 20 | PECF594, PEAF610, PEDazzle594, PEeFluor610, ECD, PI | |
B710 / 50 | PerCPCy5.5, BB700, PerCP, PECy5, PECy5.5, 7AAD, PEeFluor710 | |
B780 / 60 | PECy7, PEAF750 | |
Laser rouge 640 nm | R670 / 30 | Véhicule blindé de transport de troupes, AF647 |
R710 / 50 | AF700, APC-R700, DRAQ5 | |
R780 / 60 | APC-Cy7, APC-AF750, APCH7 |
- 5L, 23 paramètres fluorescents avec 2 paramètres de diffusion
- Option d'échantillonneur à haut débit (plaque à 96 puits)
Zone | Filtre passe-bande | Étiquettes fluorescentes courantes (la liste n'est pas exhaustive) |
---|---|---|
Laser UV 349 nm | UV379/29 | BUV395, Spark UV 387, SBUV400 |
UV515/30 | DAPI, BUV496, bleu LD, UV Zombie, SBUV510 | |
UV586/15 | BUV563, SBUV575, cFluor UV570 | |
UV673/30 | BUV661, SBUV665, cFluor UV670 | |
UV740/35 | BUV737, SBUV740, cFluor UV740 | |
UV820/60 | BUV805, SBUV795, cFluor UV790 | |
Laser UV 405 nm | V431 / 28 | BV421, Bleu Pacifique, V450, EF450, SB436, AF405, Violet LD |
V525 / 30 | BV510, V500, AmCyan, Pac Orange, LD Aqua | |
V610 / 20 | BV605, SBV600, cFluor V605, cFluor V610 | |
V670 / 30 | BV650 | |
V710 / 50 | BV711, SBV702, cFluor V715 | |
V780 / 60 | BV750, BV786, BV785, SBV780, cFluor V780 | |
Laser bleu 488 nm | B515 / 20 | FITC, BB515, GFP, AF488, cFluor B532, CFSE |
B610 / 20 | BB630, RB613, NovaBlue610 | |
B710 / 50 | PerCPCy5.5, BB700, PerCP, RB670, cFluor B690 | |
B780 / 60 | BB790, RB780, NovaBlue 760, NovaBlue 800 | |
Laser jaune/vert 561 nm | YG586/15 | PE, RFP, tdTomato AF568, BYG584, cFluor BYG575 |
YG610/20 | PECF594, PEDazzle594, PEeFluor610, PI, mCherry | |
YG670/30 | PECy5, PECy5.5, NovaYellow 690, 7AAD | |
YG780/60 | PECy7, NovaYellow 810, cFluor BYG781 | |
Laser rouge 637 nm | R670 / 14 | APC, AF647, cFluor R659, rouge lointain LD |
R730 / 45 | AF700, APC-R700, cFluor R720 | |
R780 / 60 | APC-Cy7, APC-AF750, APCH7, cFluor R780 |
- 5L, 64 détecteurs, plus de 40 paramètres de fluorescence avec 3 paramètres de diffusion (FSC (488 nm), SSC (405 nm), SSC-B (488 nm)
- L'Aurora C dispose d'une option d'échantillonneur à haut débit (plaque à 96 puits ou tube à 40 puits)
Zone | Développement | Filtre passe-bande | Fluorures courantes (liste non exhaustive) |
---|---|---|---|
Laser UV 355 nm | UV1 | NUV373/15 | |
UV2 | NUV388/15 | BUV395 | |
UV3 | NUV428/15 | ||
UV4 | NUV443/15 | ||
UV5 | NUV458/15 | ||
UV6 | NUV473/15 | ||
UV7 | NUV542/28 | BUV496 | |
UV8 | NUV542/28 | ||
UV9 | NUV582/31 | BUV563 | |
UV10 | NUV613/31 | ||
UV11 | NUV664/27 | BUV661 | |
UV12 | NUV692/28 | ||
UV13 | NUV720/29 | BUV737 | |
UV14 | NUV750/30 | ||
UV15 | NUV780/30 | ||
UV16 | NUV812/34 | BUV805 | |
Laser violet 405 nm | V1 | V428 / 15 | BV421 |
V2 | V443 / 15 | AF405, SB436 | |
V3 | V458 / 15 | PacBlue, eFluor450 | |
V4 | V473 / 15 | BV480 | |
V5 | V508 / 20 | eFluor506 | |
V6 | V525 / 17 | ||
V7 | V542 / 17 | BV510 | |
V8 | V581 / 19 | BV570, PacOrange | |
V9 | V598 / 20 | ||
V10 | V615 / 20 | BV605, SB600 | |
V11 | V664 / 27 | BV650, SB645 | |
V12 | V692 / 28 | ||
V13 | V720 / 29 | BV711, SB702 | |
V14 | V750 / 30 | BV750 | |
V15 | V780 / 30 | BV785, BV786 | |
V16 | V812 / 34 | ||
Laser bleu 488 nm | B1 | B508 / 20 | BB515 |
B2 | B525 / 17 | FITC, AF488 | |
B3 | B542 / 17 | AF532 | |
B4 | B581 / 19 | ||
B5 | B598 / 20 | ||
B6 | B615 / 20 | ||
B7 | B661 / 17 | ||
B8 | B679 / 18 | PerCP | |
B9 | B697 / 19 | BB700, PerCPCy5.5 | |
B10 | B717 / 20 | PerCP-eFluor710 | |
B11 | B738 / 21 | ||
B12 | B760 / 23 | ||
B13 | B783 / 23 | ||
B14 | B812 / 34 | ||
Laser jaune/vert 561 nm | YG1 | YG577/20 | PE |
YG2 | YG598/20 | ||
YG3 | YG615/20 | PEDazzle594, PECF594, PE-AF610, PE-eFluor610 | |
YG4 | YG661/17 | ||
YG5 | YG679/18 | PECy5 | |
YG6 | YG697/19 | ||
YG7 | YG720/29 | PECy5.5, PE-AF700 | |
YG8 | YG750/30 | ||
YG9 | YG780/30 | PECy7 | |
YG10 | YG812/34 | ||
Laser rouge 638 nm | R1 | R661 / 17 | APC |
R2 | R679 / 18 | AF647, eFluor660 | |
R3 | R697 / 19 | ||
R4 | R717 / 20 | AF700, APC-R700 | |
R5 | R738 / 21 | ||
R6 | R760 / 23 | ||
R7 | R783 / 23 | APCCy7, APCH7, APC-AF750, APCFire750 | |
R8 | R812 / 34 |
Fluorochrome | Filtre disponible |
---|---|
Flux de calcium | 405/20 |
Population latérale | 645LP |
VFR | 546/20 |
Cytomètres de flux d'imagerie
- 5L, jusqu'à 10 paramètres fluorescents avec deux images en fond clair
- Instrument à 12 canaux et 2 caméras
- Diffusion latérale dans le canal 6 ou le canal 12 (laser à diffusion 785 nm dédié)
- Grossissement 20x, 40x, 60x
- Profondeur de champ étendue (EDF, 16 µ) et option d'auto-échantillonneur (format de plaque 96 puits)
1 Camera | Filtre passe-bande | Fluorures courantes (liste non exhaustive) |
---|---|---|
488 nm bleu | Ch1 : 420-480 nm | Champ lumineux |
Ch2 : 480-560 nm | FITC, BB515, GFP, AF488, CFSE | |
Ch3 : 560-595 nm | Éducation physique, AF568 | |
Ch4 : 595-642 nm | PECF594, PEAF610, PEDazzle594, PEeFluor610, ECD, AF594 | |
Ch5 : 642-745 nm | PerCPCy5.5, BB700, PerCP, PECy5, PECy5.5, 7AAD, PEeFluor710 | |
Ch6 : 745-800 nm | PECy7, PEAF750 | |
2 Camera | Filtre passe-bande | |
405 nm violet | Ch7 : 420-505 nm | BV421, BV480, DAPI, bleu Pacifique, V450, LD Violet |
Ch8 : 505-570 nm | BV510, V500, AmCyan, Aqua LD | |
Ch9 : 570-595 nm | Champ lumineux | |
Ch10 : 595-642 nm | BV605 | |
Ch11 : 642-745 nm | AF647, APC | |
Ch12 : 745-800 nm | APC-Cy7, APC-AF750, APCH7 |
- 4L, jusqu'à 10 paramètres fluorescents avec deux images en fond clair
- Instrument à 12 canaux et 2 caméras
- Diffusion latérale dans le canal 6 ou le canal 12 (laser à diffusion 785 nm dédié)
- Grossissement 20x, 40x, 60x
1 Camera | Filtre passe-bande | Fluorures courantes (liste non exhaustive) |
---|---|---|
488 nm bleu | Ch1 : 420-480 nm | Champ lumineux |
Ch2 : 480-560 nm | FITC, BB515, GFP, AF488, CFSE | |
Ch3 : 560-595 nm | Éducation physique, AF568 | |
Ch4 : 595-642 nm | PECF594, PEAF610, PEDazzle594, PEeFluor610, ECD, AF594 | |
Ch5 : 642-745 nm | PERCPCy5.5, BB700, PerCP, PECy5, PECy5.5, 7AAD, PEeFluor710 | |
Ch6 : 745-800 nm | PECy7, PEAF750 | |
2 Camera | Filtre passe-bande | |
405 nm violet | Ch7 : 420-505 nm | BV421, BV480, DAPI, bleu Pacifique, V450, LD Violet |
Ch8 : 505-570 nm | BV510, V500, AmCyan, Aqua LD | |
Ch9 : 570-595 nm | Champ lumineux | |
Ch10 : 595-642 nm | BV605 | |
Ch11 : 642-745 nm | AF647, APC | |
Ch12 : 745-800 nm | APC-Cy7, APC-AF750, APCH7 |
Tri cellulaire activé par fluorescence (FACS)
FIASR dispose de deux trieurs de cellules dans une installation BSL2+. L'un est disponible pour le tri assisté par un opérateur et l'autre est disponible 24h/7 et XNUMXj/XNUMX pour les utilisateurs formés en réservant du temps sur le calendrier FOM.
Tri assisté par opérateur : Les chercheurs apportent des suspensions de cellules individuelles colorées à la Ressource avec des contrôles, des tampons et des tubes de collecte. Avec l'opérateur, l'expérience est mise en place et la logique de tri est définie. Une fois la configuration terminée, les chercheurs n'auront plus besoin d'être présents pour le reste du tri.
Nouveaux types : Soumettre en ligne Formulaire d'information sur le tri pour demander un rendez-vous. Les opérateurs FACS vous contacteront pour confirmer votre rendez-vous et discuter des détails.
Trier par répétition : Soumettre le court Formulaire de demande de rendez-vous de tri pour demander un rendez-vous. Les opérateurs FACS vous contacteront pour finaliser les détails du rendez-vous.
Les rendez-vous ne sont pas garantis tant qu'ils ne sont pas confirmés et enregistrés dans FOM.
Les chercheurs peuvent se référer à «Directives pour le tri" pour des informations plus détaillées.
Informations de contact :
Veuillez envoyer un e-mail à Xiaojun Liu (Xiaojun.Liu@RoswellPark.org) ou Jennifer Chinnici (Jennifer.Chinnici@RoswellPark.org).
- 5L, 23 paramètres fluorescents avec 2 paramètres de diffusion (identiques à Symphony A3)
- Options de buse : 70 um (70 psi), 85 um (45 psi), 100 um (20 psi), 130 um (13 psi)
- Options de tri : tri de tubes de 6 ml ou 5 ml à 1.5 voies, tri de tubes de 4 ml à 15 voies, tri de plaques (plaques de 6 à 384 puits), lames
Zone | Filtre passe-bande | Étiquettes fluorescentes courantes (la liste n'est pas exhaustive) |
---|---|---|
Laser UV 349 nm | UV379/28 | BUV395, Spark UV 387, SBUV400 |
UV515/30 | DAPI, BUV496, bleu LD, UV Zombie, SBUV510 | |
UV586/15 | BUV563, SBUV575, cFluor UV570 | |
UV670/30 | BUV661, SBUV665, cFluor UV670 | |
UV740/35 | BUV737, SBUV740, cFluor UV740 | |
UV820/60 | BUV805, SBUV795, cFluor UV790 | |
Laser UV 405 nm | V430 / 28 | BV421, Bleu Pacifique, V450, EF450, SB436, AF405, Violet LD |
V525 / 50 | BV510, V500, AmCyan, Pac Orange, LD Aqua | |
V610 / 20 | BV605, SBV600, cFluor V605, cFluor V610 | |
V670 / 30 | BV650 | |
V710 / 50 | BV711, SBV702, cFluor V715 | |
V780 / 60 | BV750, BV786, BV785, SBV780, cFluor V780 | |
Laser bleu 488 nm | B515 / 20 | FITC, BB515, GFP, AF488, cFluor B532, CFSE |
B610 / 20 | BB630, RB613, NovaBlue610 | |
B710 / 50 | PerCPCy5.5, BB700, PerCP, RB670, cFluor B690 | |
B780 / 60 | BB790, RB780, NovaBlue 760, NovaBlue 800 | |
Laser jaune/vert 561 nm | YG586/15 | PE, RFP, tdTomato AF568, BYG584, cFluor BYG575 |
YG610/20 | PECF594, PEDazzle594, PEeFluor610, PI, mCherry | |
YG670/30 | PECy5, PECy5.5, NovaYellow 690, 7AAD | |
YG780/60 | PECy7, NovaYellow 810, cFluor BYG781 | |
Laser rouge 637 nm | R670 / 30 | APC, AF647, cFluor R659, rouge lointain LD |
R710 / 50 | AF700, APC-R700, cFluor R720 | |
R780 / 60 | APC-Cy7, APC-AF750, APCH7, cFluor R780 |
- 4L, 13 paramètres fluorescents avec 2 paramètres de diffusion (similaires à Fortessa B et C)
- La pression de la gaine est réglable de 2 à 75 psi
- Tailles de buses 100 microns (85 et 130 microns également disponibles)
- Options de tri : tri de tubes à 4 voies, tri de plaques (plaques à 6, 12, 24, 48, 96, 384 puits)
Zone | Filtre passe-bande | Fluorures courantes (liste non exhaustive) |
---|---|---|
Laser UV 355 nm | U379 / 28 | BUV395, Indo-1 |
U460 / 14 | DAPI, Hoechst 33342, bleu LD, UV zombie | |
Laser violet 405 nm | V450 / 50 | BV421, BV480, DAPI, Bleu Pacifique, V450, EF450, SB436, AF405, Violet LD |
V530 / 30 | BV510, V500, AmCyan, Aqua LD | |
Laser bleu 488 nm | B530 / 30 | FITC, BB515, GFP, AF488, CFSE |
B575 / 25 | PE, mOrange, AF568 | |
B610 / 20 | PECF594, PEAF610, PEDazzle594, PEeFluor610, ECD, PI | |
B710 / 50 | PerCPCy5.5, BB700, PerCP, PECy5, PECy5.5, 7AAD, PEeFluor710 | |
B780 / 60 | PECy7, PEAF750 | |
Laser rouge 640 nm | R660 / 20 | Véhicule blindé de transport de troupes, AF647 |
R730 / 30 | AF700, APC-R700, DRAQ5 | |
R780 / 60 | APC-Cy7, APC-AF750, APCH7 |
- Disponible 24h/7 et XNUMXj/XNUMX pour les utilisateurs formés en réservant du temps sur le calendrier FOM
- 4L–colinéaire pour les lignes laser 488/561 nm et 405/638 nm
- 12 paramètres fluorescents et 2 paramètres de diffusion
- Tailles de buses disponibles : 70, 100 et 130 microns
- Options de tri : tri de tubes à 4 voies, tri de plaques (plaques à 6, 12, 24, 48, 96, 384 puits)
Zone | Filtre passe-bande | Fluorures courantes (liste non exhaustive) |
---|---|---|
Laser bleu 488 nm | 525/50 | FITC, BB515, GFP, AF488, CFSE |
585/30 | PE, mOrange, AF568 | |
617/30 | PECF594, PEAF610, PEDazzle594, PEeFluor610, ECD, PI | |
695/50 | PerCPCy5.5, BB700, PerCP, PECy5, PECy5.5, 7AAD, PEeFluor710 | |
785/60 | PECy7, PEAF750 | |
Laser violet 405 nm | 450/50 | BV421, BV480, DAPI, bleu Pacifique, V450, EF450, SB436, AF405, LD Violet |
525/30 | BV510, V500, AmCyan, Aqua LD | |
585/30 | BV570 | |
617/30 | BV605 | |
665/30 | APC, AF647, BV650 | |
720/60 | AF700, APC-R700, DRAQ5 | |
785/60 | APC-Cy7, APC-AF750, APCH7, BV785, BV786 |
Profilage/imagerie immunitaire à partir de lames
Le Phenocycler Fusion est un analyseur automatisé basé sur l'immunofluorescence qui effectue une visualisation cyclique de 3 analytes immunofluorescents à la fois. Ce processus peut être répété plusieurs fois et la détection simultanée de plus de 100 sondes immunofluorescentes a été rapportée. Ce processus d'imagerie est applicable aux FFPE et aux cryosections d'origine humaine et murine. Un catalogue d'anticorps pré-validés est disponible à l'adresse La Société de Biologie Spatiale | Akoya Biosciences. La conjugaison personnalisée d'anticorps à des cibles non disponibles dans le catalogue est également disponible. L'utilisation de l'instrument est réservée au personnel FIASR uniquement. Pour plus d'informations sur la technologie ou pour planifier une expérience, veuillez contacter Orla Maguire (Orla.Maguire@RoswellPark.org) ou Hans Minderman (Hans.Minderman@RoswellPark.org).
Imagerie de cellules vivantes
xCelligence-MP (Agilent)
Le système d'analyse cellulaire en temps réel (RTCA) multiplaques (MP) Agilent xCELLigence offre un moyen unique et puissant de surveiller les cellules en temps réel, sans les artefacts potentiels générés par l'utilisation de marqueurs. Cette mesure non invasive permet de détecter les changements d'adhérence, de morphologie et de viabilité sans nécessiter de surexpression des protéines rapporteuses et cibles. Cela fournit des données physiologiquement pertinentes tout au long de l'expérience.
Cet instrument est actuellement hébergé dans un incubateur du service du Dr Brentjens au 5e étage du Cancer Cell Center. Les demandes de formation et d'accès au calendrier doivent être discutées avec le Dr Terence Purdon (Terence.Purdon@RoswellPark.org).
Les plaques utilisées pour l'instrument sont disponibles auprès de FIASR sur demande au prix de 66 $ chacune. Veuillez envoyer un e-mail à FICSR@RoswellPark.org pour organiser le ramassage.
Analyseurs protéomiques
Le système xMAP INTELLIFLEX® est un analyseur multiplex à billes de flux qui peut effectuer jusqu'à 500 tests dans un seul volume de réaction en utilisant des billes magnétiques pour capturer les analytes solubles à partir de plasma, de sérum et de surnageants de culture tissulaire.
Le système Luminex® 200™ est une ancienne version de la technologie Intelliflex qui peut effectuer jusqu'à 100 tests dans un seul volume de réaction. Des kits de multiplexage pour les deux instruments sont disponibles dans le commerce auprès de plusieurs fournisseurs, notamment Millipore, BioRad, ThermoFisher et R&D Systems, avec des tests pour de nombreuses espèces et types d'échantillons différents.
Nouvelles demandes d'analyse : Contactez Nitika Sharma (Nitika.Sharma@RoswellPark.org) pour discuter des spécificités du projet.
L'analyseur Isolight d'Isoplexis/Bruker effectue une analyse automatisée hautement multiplexée du sécrétome de cellules vivantes individuelles, une analyse phosphoprotéomique et métabolique hautement multiplexée de cellules individuelles ainsi qu'une analyse des protéines en vrac/population, le tout sur une seule plateforme et dans un seul flux de travail. Des données entièrement analysées peuvent être obtenues dans les 24 heures. IsoLight est idéal pour le profilage complet des capacités sécrétoires de différents types de cellules et de cellules à différents stades de développement ou de traitement. Cliquez sur les liens pour parcourir les panels d'analytes humains et murins disponibles dans le commerce pour les cellules en vrac (Codeplex) ou individuelles (Isocode) analyse.
Le test ELISpot (enzyme-linked immunosorbent spot) mesure quantitativement la fréquence de sécrétion de cytokines pour une cellule unique. Une plaque est recouverte d'anticorps contre la cytokine d'intérêt. Des lymphocytes T sont ajoutés avec ou sans stimuli. L'anticorps de revêtement capture la cytokine sécrétée et un deuxième anticorps spécifique de la cytokine est couplé à un substrat chromogène et utilisé pour la détection. Les résultats apparaissent sous forme de points, chaque point correspondant à une cellule sécrétant des cytokines. Le nombre de points est égal au nombre de cellules sécrétant des cytokines pour un antigène spécifique. Le test FluoroSpot modifié utilise un anticorps marqué par fluorescence au lieu d'un système de substrat biotine-streptavidine.
FIASR dispose de l'analyseur CTL S6 FluoroCore qui peut également effectuer le comptage des PBMC. Le FluoroCore est équipé d'optiques et d'un canal fluorescent supplémentaire qui, avec la suite de comptage de cellules LDA dédiée de CTL, peut compter des dizaines d'échantillons de PBMC en quelques minutes, y compris la documentation de la viabilité et le calcul des volumes de remise en suspension.
CTL fournit plusieurs kits pour le lecteur dans FIASR (kits d'une seule couleur).
- 1 laser (488 nm) avec filtre passe-bande 520 (FITC, Alexa Fluor® 488, Acridine Orange, sfGFP, GFP, Yo-Pro™, CFSC, Sytox™ Green)
- Plaque à 96 ou 384 puits et plaque en bande au format 96 puits
- Analyse FluoroSpot monochrome pour une quantification précise de l'analyte sécrété par cellule via la fonction d'imagerie HDR
- Sert de lecteur à haut débit pour les tests de cytotoxicité à médiation cellulaire
- Sortie de données standard FCS
Le système d'immuno-essai automatisé ELLA effectue des immuno-essais dans une cartouche microfluidique Simple Plex, permettant aux chercheurs d'acquérir des données d'essai validées hautement reproductibles avec très peu d'étapes manuelles, et constitue la seule plate-forme de test autonome pour l'exécution simultanée de plusieurs immuno-essais basés sur ELISA.
Une fois l'échantillon chargé, il passe par un canal microfluidique qui lie la protéine d'intérêt. Ensuite, Ella élimine l'analyte non lié et ajoute un réactif de détection. Étant donné que chaque canal comporte trois nano-réacteurs en verre (GNR) recouverts d'un anticorps de capture, vous obtiendrez des réponses en triple pour chaque échantillon. Les réponses sont ensuite générées à partir de la courbe standard calibrée en usine fournie avec chaque cartouche.
Le volume d'analyse requis est de 25 μL ou moins pour des analyses personnalisées jusqu'à 4-plex et les données sont prêtes en deux heures à partir de la préparation de l'échantillon. Les cartouches sont disponibles prêtes à l'emploi ou personnalisables à Bio-Techne.
Analyseurs métaboliques
L'analyseur de flux extracellulaire Seahorse XFe96 suit et enregistre le taux de consommation d'oxygène (OCR) et le taux d'acidification extracellulaire (ECAR) qui reflète la respiration mitochondriale et la glycolyse en temps réel au format de plaque à 96 puits.
Les tests validés comprennent le test de stress de la glycolyse, le test de stress mitogénique cellulaire, le test de flexibilité du carburant mitogénique, le test du taux de glycolyse, le test du taux d'ATP, le test du phénotype énergétique cellulaire et la mesure de l'oxydation des acides gras. Des tests sur mesure sont également disponibles. Tous les kits peuvent être consultés sur Agilent.
La normalisation des données Seahorse peut être facilitée par le comptage cellulaire in situ à l'aide du BioTek Cytation 5, qui ne nécessite aucun traitement d'échantillon supplémentaire. Cytation 5 est une plate-forme d'imagerie cellulaire multicanal capable d'automatiser le comptage cellulaire à partir d'images nucléaires marquées par fluorescence après l'injection d'un colorant perméable aux cellules tel que le Hoechst 33342 via le système Seahorse. L'instrument effectue également une imagerie en champ clair à contraste élevé, capturant des images de puits entiers pour fournir un retour visuel et un contrôle qualité des conditions d'ensemencement des cellules.
Le calScreener™ de Symcel mesure l'activité métabolique totale d'un échantillon, en temps réel et pendant une durée illimitée pouvant être définie de quelques heures à quelques mois. Le calScreener mesure directement la chaleur produite par les processus métaboliques de l'échantillon ; la production d'énergie est mesurée en μW.
Le calScreener est un nouvel ajout au FIASR (juin 2024) et nous accueillons favorablement toute étude visant à tester l'instrument. Contactez Orla Maguire (Orla.Maguire@RoswellPark.org) ou Wei Luo (Wei.Luo@RoswellPark.org) pour plus d'informations.
Analyseur de petites particules
L'analyseur de petites particules ZetaView utilise l'analyse de suivi des nanoparticules (NTA) qui relie le taux de mouvement brownien des particules en suspension liquide à la taille des particules. Le ZetaView NTA mesure le profil de distribution de taille des petites particules d'environ 10 à 1000 XNUMX nanomètres (nm) en suspension. Le ZetaView est également capable de mesurer le potentiel zêta des particules, qui est une mesure de la charge électrique à la surface des nanoparticules.
L'application principale de l'analyse NTA à Roswell Park est la mesure des vésicules extracellulaires (EV) et des exosomes, des vésicules dérivées de cellules d'un diamètre compris entre 30 et 100 nm.
Les analyseurs ZetaView sont équipés d'un laser 488 nm ou 405 nm pour détecter les particules fluorescentes si vous le souhaitez.
Les instruments ZetaView sont disponibles 24h/7 et XNUMXj/XNUMX pour les utilisateurs formés en réservant du temps sur le calendrier FOM.
Les chercheurs intéressés doivent contacter notre opératrice principale Nitika Sharma (Nitika.Sharma@RoswellPark.org) ou Hans Minderman (Hans.Minderman@Roswellpark.org) pour une consultation de projet et pour discuter des possibilités de service complet ou de formation.
Logiciel d'analyse
- FCS Express 7.0 : Roswell Park propose une licence réseau gratuite pour tous les employés de Roswell. Commandez le logiciel via ServiceNow.
- FlowJo 10 : FIASR dispose de 2 postes de travail équipés de FlowJo qui peuvent être utilisés pendant les heures ouvrables. Les PI individuels sont responsables de l'achat de leurs propres licences s'ils le souhaitent.
- WinList 9.0 : Roswell Park dispose d'une licence réseau gratuite pour tous les employés de Roswell. Contactez Joseph Hanson pour organiser l'accès.
- Modfit 4.0 : Roswell Park dispose d'une licence réseau gratuite pour tous les employés de Roswell. Contactez Joseph Hanson pour organiser l'accès.
- OMIQ : Roswell propose plusieurs licences monopostes aux employés de Roswell. Pour toute demande de renseignements, veuillez contacter Hans Minderman.
- IDÉES 6.2 (Amnis) : FIASR dispose d'une licence gratuite pour tous les employés de Roswell.
- Amnis AI : Amnis AI fonctionne avec le logiciel d'analyse IDEAS 6.3 pour aider les chercheurs à classer les objets à l'aide d'algorithmes d'étiquetage assisté par ordinateur et d'IA. FIASR dispose d'un poste de travail avec Amnis AI et IDEAS v6.3, l'accès est disponible pendant les heures ouvrables. Les demandes de renseignements peuvent être adressées à Hans Minderman.
- Image Pro Plus 6.3 : Image Pro Plus 6.3 est un logiciel d'analyse d'image avancé. Il accepte une grande variété de formats de fichiers image. FIASR dispose d'une licence d'utilisation pour une utilisation pendant les heures ouvrables.
- ImageJ : ImageJ est un logiciel d'analyse d'images gratuit basé sur Java, développé par les National Institutes of Health. Les employés de Roswell peuvent commander le logiciel via ServiceNow.
Nouveaux comptes
FIASR utilise FOM (Gestionnaire d'installations en ligne) en tant que calendrier intégré, système de connexion aux instruments et de facturation. Chaque nouvel utilisateur devra créer un compte individuel dans FOM.
Chaque laboratoire (ou entreprise) aura également besoin d'un compte de groupe pour se connecter au logiciel informatique de nos instruments d'analyse. Un seul compte sera créé par PI. Pour plus d'informations sur les nouveaux comptes, contactez Orla Maguire.
Cursus de formation
Le personnel de FIASR dispense plusieurs cours gratuits pour informer la communauté de Roswell Park et de Buffalo sur les techniques employées dans notre ressource partagée. Les cours durent généralement entre une et trois heures.
OBLIGATOIRE : Introduction à la cytométrie de flux : Cours didactique d'une heure et demie présentant les bases de la cytométrie de flux, la conception expérimentale, l'analyse et décrivant les règles à suivre en FIASR.
Trois séances individuelles de formation aux instruments de 2 heures comprennent :
- Formation initiale à partir de nos échantillons validés
- Le chercheur apporte ses propres échantillons
- Dépannage et renforcement des procédures correctes
Pour les instruments disponibles 24h/7 et XNUMXj/XNUMX, une séance de formation supplémentaire avec le personnel du FIASR est nécessaire pour un accès en dehors des heures normales.
D'autres cours optionnels sont proposés en fonction de la demande. Les Drs Minderman et Maguire enseignent également le cours de troisième cycle RPG564 Principes de la cytométrie de flux et d'image au semestre d'automne ouvert à tous les étudiants diplômés et disponible pour l'audit si l'espace le permet.
Contactez Orla Maguire (Orla.Maguire@RoswellPark.org) pour plus d'informations.
Notre équipe
Lieu et horaires
Centre de lutte contre le cancer de Roswell Park
Ressource partagée sur l'analyse des flux et de l'immunité
Rues Elm et Carlton
Buffalo, État de New York 14263
Emplacement:Centre de cellules cancéreuses 3e étage
Téléphone du laboratoire général: 716-845-3470
Courriel général du laboratoire : FICSR@RoswellPark.org
Informations sur la subvention
Veuillez mentionner la ressource partagée Flow & Immune Analysis dans votre publication comme suit :
Les services de cytométrie ont été fournis par la ressource partagée Flow & Immune Analysis du Roswell Park Comprehensive Cancer Center, financée en partie par la subvention de soutien du NCI Cancer Center NCI P30CA016056 et NCI R50 R50CA211108.
Si vous utilisez le cytomètre de flux d'imagerie ImageStream dans vos publications, veuillez remercier la subvention Shared Instrument qui a financé l'acquisition de cet instrument comme suit :
L'instrument ImagestreamX-MKII a été financé par la subvention d'instrument partagé du NIH S10OD018048.
Si vous utilisez le SONY MA900 dans vos publications, veuillez reconnaître la subvention Shared Instrument qui a financé l'acquisition de cet instrument comme suit :
Le trieur SONY MA900 a été financé grâce à la subvention NIH Shared Instrument Grant S10OD025183.
Le laboratoire d'analyse de flux et d'immunité (FIASR) du Roswell Park Comprehensive Cancer Center offre un large éventail de technologies de pointe sur diverses plateformes, notamment la cytométrie de flux et d'image, la protéomique, la métabolomique et les techniques de profilage spatial, pour soutenir les chercheurs de Roswell. Le FIASR est reconnu par l'International Society for the Advancement of Cytometry (ISAC) comme l'un des 14 laboratoires de ressources partagées au monde pour son excellence opérationnelle et son respect des meilleures pratiques. Le Centre de cancérologie s'est engagé stratégiquement à développer les thérapies immunitaires et cellulaires, augmentant ainsi la demande de soutien en laboratoire pour les biomarqueurs translationnels et le suivi clinique des patients. Le FIASR constitue une ressource exceptionnelle et essentielle pour explorer la biologie sous-jacente à ces nouvelles modalités thérapeutiques. Cette ressource partagée améliore l'efficacité financière et opérationnelle, ainsi que la rigueur et la reproductibilité des tests, grâce à l'application de protocoles standardisés de maintenance, d'exploitation et de validation approuvés par l'ISAC, facilitant ainsi la mise en œuvre de ces techniques en milieu clinique. En plus de servir Roswell Park et les institutions de recherche locales, FIASR sert d'installation principale pour plusieurs essais cliniques multi-sites biopharmaceutiques et NIH.
Technologies et services d'équipements
En plus du logiciel d'acquisition de données pour les équipements mentionnés dans le tableau, les logiciels d'analyse suivants sont disponibles gratuitement pour les utilisateurs : WinList et ModFit (Verity), FCSExpress (DeNovo), IDEAS (Amnis) ; AMNIS-AI ; FlowJo (BD Bioscience), OMIQ, VisioPharm et ImagePro (MediaCybernetics). Un réseau interne sur un serveur géré par le service informatique du Centre de cancérologie avec une capacité de stockage extensible a été mis en place pour la gestion des données. Tous les enquêteurs de l'établissement ont un accès protégé par mot de passe à ce réseau à partir de leur ordinateur de bureau.
Les autres équipements de soutien comprennent : une chambre froide, des hottes aspirantes, des installations d'autoclave et de lavage du verre, 3 incubateurs à CO2, 3 hottes de culture tissulaire à flux laminaire Bioguard, des centrifugeuses de paillasse, des microcentrifugeuses réfrigérées, des microscopes inversés et conventionnels avec contraste de phase, capacité de fluorescence et accessoires pour caméra numérique, PCR, congélateurs -80 et réservoirs de stockage de N2 liquide, lecteur ELISA et équipement plus petit nécessaire aux études cellulaires et moléculaires.
Principaux services du FIASR : (i) Cytométrie conventionnelle, à spectre complet et à flux de masse, (ii) Tri, (iii) Cytométrie de flux d'imagerie, (iv) Analyse multi-omique spatiale, (v) Imagerie de cellules vivantes, (vi) Dosages de billes multiplex Luminex, (vii) Analyse du sécrétome à cellule unique, (viii) Dimensionnement des nanoparticules, (ix) ELISPOT, (x) ELISA, (xi) Éducation et formation sur tout ce qui précède, (xii) Préparation et analyse d'échantillons pour tout ce qui précède.